ELISA平臺(tái)

抗體親和力測(cè)定

在ELISA平臺(tái)上利用p-tau181抗原分別檢測(cè)p-tau181兔單克隆抗體H484c7、R486c5，EC50分別為6.97ng/mL、0.91ng/mL。

圖1. A35R抗體（R383e5）ELISA檢測(cè)結(jié)果

圖2. A35R抗體（R387c6）ELISA檢測(cè)結(jié)果

時(shí)間分辨免疫熒光平臺(tái)

抗原檢測(cè)

將p-tau181合成抗原進(jìn)行梯度稀釋（濃度范圍0~50000pg/mL），用p-tau181抗體H484c7、R486c5進(jìn)行檢測(cè)。

圖3. p-tau181抗原檢測(cè)結(jié)果

序號(hào)	抗原濃度 (pg/mL)	T/C值
1	0	0.002292977
2	50	0.006239696
3	100	0.008851572
4	200	0.015496176
5	400	0.02941394
6	2000	0.132607819
7	10000	0.560873943
8	50000	1.29634341

表1. p-tau181抗原檢測(cè)數(shù)據(jù)

微管相關(guān)蛋白（Tau）是20世紀(jì)70年代中期通過(guò)研究微管形成所需的因素發(fā)現(xiàn)的。Tau蛋白促進(jìn)微管蛋白組裝成微管（神經(jīng)元細(xì)胞骨架的主要組成部分，定義正常形態(tài)并為神經(jīng)元提供結(jié)構(gòu)支持）。Tau由17號(hào)染色體上的MAPT基因編碼，長(zhǎng)度超過(guò)100kb，包含16個(gè)外顯子。外顯子1是啟動(dòng)子的一部分，被轉(zhuǎn)錄但不翻譯。外顯子1、4、5、7、9、11、12和13是組成型外顯子。外顯子2、3和10交替剪接并在成人大腦中表現(xiàn)出來(lái)。外顯子2可以單獨(dú)出現(xiàn)，但外顯子3不會(huì)獨(dú)立于外顯子2出現(xiàn)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，外顯子2、3和10的選擇性剪接產(chǎn)生6種tau亞型，這些亞型在大腦發(fā)育過(guò)程中差異表達(dá)。

Tau與微管蛋白結(jié)合受其磷酸化狀態(tài)的調(diào)節(jié)，磷酸化是調(diào)控tau結(jié)構(gòu)和功能的重要翻譯后修飾，主要發(fā)生在絲氨酸（Ser）和蘇氨酸（Thr）殘基和部分酪氨酸（Tyr）殘基上。正常成熟腦內(nèi)tau蛋白磷酸化位點(diǎn)很少，平均只有2、3個(gè)，而AD患者腦中Tau蛋白磷酸化位點(diǎn)高達(dá)40個(gè)以上。成人腦組織中最長(zhǎng)的Tau蛋白異構(gòu)體形式（Tau441）共含有80個(gè)Ser和Thr殘基，這些殘基都是潛在的磷酸化修飾位點(diǎn)，其中Thr²³¹、Ser²⁶²的磷酸化直接影響了tau蛋白與微管的結(jié)合。磷酸化狀態(tài)通常由激酶和磷酸酶對(duì)tau分子的協(xié)調(diào)作用進(jìn)行調(diào)節(jié)。在病理?xiàng)l件下，例如AD的情況，tau蛋白的異常磷酸化不僅會(huì)降低其微管蛋白結(jié)合能力，導(dǎo)致微管解體，還會(huì)以神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFT）的形式自我聚合和聚集。