抗原性能評估指標(biāo)

抗原作為體外診斷試劑核心原料對于整個免疫檢測分析系統(tǒng)有著重要的作用?？乖\斷原料可以用于制備校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品，還可以作為免疫原制備抗體。目前，抗原診斷原料的性能評估指標(biāo)沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，一般以活性，純度，批間差，穩(wěn)定性等作為抗原診斷原料的評估指標(biāo)。

抗原分類

抗原診斷原料分為三類：天然抗原，重組抗原，合成多肽抗原。天然抗原是從動物組織或微生物體外等提取純化出來的抗原；重組抗原是指在將抗原基因鏈接載體轉(zhuǎn)入原核或真核細(xì)胞中，體外重組表達(dá)純化得來的；合成多肽抗原是以合成小肽作為抗原，通常需要鏈接載體來增加其免疫原性。

以下是天然抗原、重組抗原、合成抗原的優(yōu)缺點(diǎn)：

抗原活性

抗原活性的檢測需要和天然抗原進(jìn)行比對。通常，重組抗原的基因序列、氨基酸組成、分子量大小與天然抗原是一樣的?？乖臎Q定簇可能是由一級結(jié)構(gòu)決定的線性連續(xù)的，也可能是由三級結(jié)構(gòu)決定的不連續(xù)的空間構(gòu)象。線性表位即使蛋白變性，也具有免疫原性；而構(gòu)象表位只有在空間結(jié)構(gòu)完整的情況下才具有免疫原性。因此，抗原診斷原料的生物活性與表位信息有關(guān)，如果是線性表位，則與活性沒有很大關(guān)系；如果是構(gòu)象表位，則需要抗原蛋白的正確折疊，保證其活性，才能與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，避免產(chǎn)生假陽性。

純度

抗原的純度可以用SDS-PAGE或HPLC進(jìn)行測定，抗原診斷原料的純度最好大于95%?？乖c抗體一樣，也會需要標(biāo)記，當(dāng)其純度不夠時，可能會影響標(biāo)記效率，從而影響特異性、反映信號、背景值等。同時，抗原純度不夠，其免疫效率也會降低，影響抗體的制備。

批間差

是指每批次產(chǎn)品的可重復(fù)性。重復(fù)性則是保證體外診斷試劑降低批間差異并且穩(wěn)定生產(chǎn)的前提條件。重復(fù)性和生產(chǎn)工藝密切掛鉤，因此也是體現(xiàn)抗原診斷原料質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。

穩(wěn)定性

穩(wěn)定性作為體外診斷試劑保持產(chǎn)品安全有效的重要指標(biāo)，對產(chǎn)品的生產(chǎn)、運(yùn)輸、保存和使用等環(huán)節(jié)具有重要的指導(dǎo)意義。抗原診斷原料并不像抗體那么穩(wěn)定，需要特定的Buffer進(jìn)行儲存，通常Buffer包括BSA、尿素、甘油、蛋白保護(hù)劑等。多數(shù)供應(yīng)商提供的抗原的儲存條件為-20℃或-70℃，或4度儲運(yùn)的凍干粉，并強(qiáng)調(diào)抗原稀釋分裝后應(yīng)冷凍保存。（抗原診斷試劑穩(wěn)定性評估）

選購抗原診斷原料時一般注意以下幾點(diǎn)：

• 外觀
  大部分抗原原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或顆粒；或?yàn)榘咨勰?，不含其它雜質(zhì)。
• 純度和分子量
  抗原診斷原料的純度與分子量測定與抗體一致。主要方法是SDS-PAGE電泳后經(jīng)考馬斯亮藍(lán)或者銀染色法進(jìn)行染色，然后對條帶進(jìn)行掃描分析。此外，高效液相層析也可以用于純度和分子量測定。作為體外診斷試劑用的IVD原料，用銀染法染色后，純度一般要大于90%；用考馬斯亮藍(lán)染色后，純度一般都要大于95%。
• 生物安全性
  人源抗原務(wù)必要求原料供應(yīng)商確保HBsAg、HCV、HIV、TP呈陰性。

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