實時熒光定量PCR預(yù)混液（2×SYBR Green Mix）
產(chǎn)品參數(shù)
| 產(chǎn)品名稱 | 組成成分 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 2×SYBR Green qPCR預(yù)混液 |
熱啟動Taq酶、SYBR GreenⅠ、dNTP Mix、Mg2+、Enhancer、特殊穩(wěn)定劑和優(yōu)化的緩沖液 | 1 ml | M107R1 |
| 5 ml |
產(chǎn)品特征
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制，抑制非特異性擴增 。
重復(fù)性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
產(chǎn)品應(yīng)用
1）基于熒光定量PCR檢測；
2）核酸擴增和基因表達；
3）自動化和高通量的定量基因分型研究；
4）基因組學(xué)相關(guān)應(yīng)用。
使用方法
（1）qPCR反應(yīng)體系配制
| 試劑 | 50μl | 20 μl |
| SYBR Green預(yù)混液 | 25 μl | 10 μl |
| Forward Primer（10 μM） | 1 μl | 0.4 μl |
| Reverse Primer（10 μM） | 1 μl | 0.4 μl |
| 模板DNA | X μl | X μl |
| 無菌超純水 | Up to 50 μl | Up to 20 μl |
（2）PCR 反應(yīng)條件
| 95℃ | 15min | 預(yù)變性 |
| 95℃ | 10 Sec | 循環(huán)反應(yīng)（40 cycles） |
| 55~60℃ | 20 Sec | |
| 72℃ | 20 Sec | |
| 95℃ | 15 Sec | 融解曲線 |
| 60℃ | 60 Sec | |
| 95℃ | 15 Sec |
（3）qPCR反應(yīng)有效性確認標(biāo)準(zhǔn)
1）線性關(guān)系以及擴增效率確認：
標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)（R2）＞0.98
標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率介于 -3～-3.5之間
PCR擴增效率（E）介于0.9～1.2之間。
2）重復(fù)性確認：
重復(fù)管之間的STD＜0.2
注：詳細操作流程參照說明書。
案例介紹
（1）擴增曲線
圖1. 歐凱生物，國產(chǎn)試劑，進口試劑以及三者比較擴增曲線對比圖。由圖1可以看出，在同樣的擴增條件下，歐凱生物的SYBR Green Mix起峰快，Ct值低，可重復(fù)性好，擴增效率高。
（2）熔解曲線
圖2. 歐凱生物，國產(chǎn)試劑，進口試劑以及三者比較熔解曲線圖。由圖2可以看出，在同樣的條件下，歐凱生物的熔解曲線單一峰，具有特異性強、重復(fù)性好、靈敏度高。
（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖3.歐凱生物，國產(chǎn)試劑，進口試劑對比圖。歐凱生物的SYBR Green Mix使定量PCR可以在寬廣的定量范圍內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
原始數(shù)據(jù)如下：
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