親和力檢測(cè)

方法：生物膜層干涉技術(shù)（BLI）

結(jié)果：親和力大小依次為 Nab（R173c1）-RBD（K1519）>Nab（R175a2）-RBD（K1516）> ACE2（K1521）-RBD（K1516）KD值分別為26.8pM、84.1pM、1.26nM。

新冠納米中和抗體R173c1和R175a2與RBD的結(jié)合力遠(yuǎn)高于ACE2與RBD的結(jié)合力。這種結(jié)合力的差異，使納米中和抗體可有效阻斷RBD-ACE2的結(jié)合。

抑制效率檢測(cè)

方法：在膠體金平臺(tái)上，檢測(cè)中和抗體的抑制效率；包被ACE2（貨號(hào)K1521）；標(biāo)記RBD（貨號(hào)K1516）。樣本為0、0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml不同濃度的中和抗體，中和抗體分別是歐凱的R173c1、R175a2以及國(guó)內(nèi)競(jìng)品Y公司的中和抗體（用Y表示）。

結(jié)果：R173c1、R175a2和Y不同程度地抑制RBD與ACE2的結(jié)合。R173c1和R175a2的抑制效率均高于Y，其中帶Fc標(biāo)簽的R175a2抑制效果最明顯。

特異性檢測(cè)

方法：在膠體金平臺(tái)，包被中和抗體（R175a2和Y）,標(biāo)記RBD（K1516）,用空白的PBS緩沖液上樣檢測(cè)。

結(jié)果：R175a2與Y公司的中和抗體均可與RBD結(jié)合，形成中和抗體-RBD復(fù)合物；且納米抗體R175a2的顯色更深。

中和抗體是指免疫系統(tǒng)在經(jīng)受病毒刺激后會(huì)產(chǎn)生的可以和病毒顆粒結(jié)合，并阻止病毒感染細(xì)胞，把病毒“中和”掉的抗體。中和抗體不同于常規(guī)的抗體，中和抗體是特異針對(duì)病毒中和表位產(chǎn)生的抗體，可直接靶定到病毒中和表位，使病毒失去結(jié)合受體的能力，這一過(guò)程不需要激活T-淋巴系統(tǒng)。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)不同結(jié)合表位的中和抗體活性也存在差異，其中與病毒中和表位完全吻合的中和抗體活性最好。

在新冠疫情大肆蔓延的背景下，國(guó)家科學(xué)技術(shù)部發(fā)布了《新型冠狀病毒中和抗體產(chǎn)品研發(fā)應(yīng)急項(xiàng)目申報(bào)指南》，申報(bào)指南指出中和抗體具備阻斷病毒侵染目的細(xì)胞的潛力，且單克隆抗體具有作用機(jī)制明確、易于大規(guī)模產(chǎn)生的優(yōu)點(diǎn)，是新冠疫苗評(píng)價(jià)、中和抗體藥物等研究的重點(diǎn)方向。

2019新型冠狀病毒（2019-nCoV）中和抗體的分類

按照抗體結(jié)構(gòu)分類

圖1.傳統(tǒng)IgG抗體、重鏈IgG抗體、納米抗體示意圖

按照表位分類

• 識(shí)別RBD表位

Ⅰ型：阻斷RBD與ACE2的結(jié)合，占據(jù)RBM，這類中和抗體有個(gè)通用的重鏈家族基因IGHV3–53

Ⅱ型：干擾RBD與受體結(jié)合，或功能上模仿受體結(jié)合，觸發(fā)S蛋白融合的提前發(fā)生，捕獲不穩(wěn)定的“上”構(gòu)象RBD

Ⅲ型：依靠N-聚糖，鎖定“下”構(gòu)象的RBD，阻止與ACE2的結(jié)合

Ⅳ型：識(shí)別“上”和“下”構(gòu)象RBD，識(shí)別表位一個(gè)是RBM，一個(gè)是與RBM極少或不重疊的表位

• 識(shí)別NTD表位
• 識(shí)別S2表位