流式細胞術平臺

取全血用CD45-PerCP抗體染色，應用BD FACSCanto™ II流式細胞儀進行CD45細胞表達分析，可見CD45免疫細胞分群。

圖1：人外周血免疫細胞CD45表達的流式細胞術分析

CD45又稱白細胞共同抗原（Leukocyte Common Antigen, LCA），是一種廣泛存在于白細胞表面的單鏈跨膜蛋白，CD45包含三個結構域：

（1）胞漿C末端：CD45胞質(zhì)區(qū)結構域是高度保守的，在哺乳動物中同源結構占95%。該結構域約含700個氨基酸殘基，由兩個具有PTPase活性的蛋白絡氨酸磷酸酯酶結構域組成，D1具有磷酸酶活性，D2通過與D1互作改變空間構象而使CD45分子結構趨于穩(wěn)定并具備最佳活性。CD45分子通過胞質(zhì)區(qū)的PTPase活性能使底物P56^lck和P59^fyn上絡氨酸脫磷酸而激活，在細胞信號轉(zhuǎn)導中起重要作用。

（2）跨膜區(qū)域：含有22個氨基酸殘基。

（3）胞膜外糖基化氨基末端區(qū)域：胞膜外區(qū)含有約400個氨基酸，有11-15個N-糖基化位點及多個O-糖基化位點，整個結構域呈現(xiàn)高糖基化狀態(tài)。轉(zhuǎn)錄過程中對編碼胞外結構域4、5、6（或A、B、C）三個外顯子的選擇性剪切產(chǎn)生了多個異構體，CD45異構體選擇性地表達在各種白細胞不同分化階段，同時隨著細胞的分化和激活，CD45異構體之間可發(fā)生轉(zhuǎn)換。所有的CD45異構體可歸類為4種特異性單抗即CD45RA、CD45RB、CD45RC和CD45RO。CD45RA識別外顯子4的表位，存在于初始T細胞表面；CD45RB識別外顯子5的表位，表達于B細胞、初始T細胞、胸腺細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞，CD45RB在T細胞受體和B細胞受體信號轉(zhuǎn)導過程中起重要作用，當初始T細胞分化為記憶T細胞時，CD45RB表達下調(diào)；CD45RO不包含4、5、6三個外顯子，主要存在于激活或記憶T細胞表面。

圖2：CD45胞膜外區(qū)可變剪切